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ELISAS實(shí)驗(yàn)抗原的攝取
更新時(shí)間：2013-11-19 點(diǎn)擊次數(shù)：1904次
ELISAS實(shí)驗(yàn)抗原的攝取
（1） 抗原的攝取 任何血清學(xué)試驗(yàn)都依賴于具有價(jià)、特異性強(qiáng)的抗血清的產(chǎn)生，而抗血清的制備離不開抗原的收集、保存和提取。采回的害蟲饑餓24h后，將等體積的磷酸緩沖液（PBS）滴入備用的害蟲中，研磨后加入過(guò)量的PBS（PH=7.4）,在4℃下攪拌24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,分離上清液。沉渣用上法重復(fù)抽提一次。
將兩次所得的上清液混合后，置于4℃下更換多次冷鹽水透析24h或48h。透析液用冰凍干燥法或反透析法進(jìn)行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量，得到適當(dāng)濃度的蛋白質(zhì)溶液即位抗原。
抽提過(guò)程中應(yīng)注意：①所有的處理都需在低溫（4℃）下進(jìn)行，以防蛋白質(zhì)變性：②若抗原溶液需保存較長(zhǎng)的時(shí)間，則需加防腐劑（如NaN3）或在凍干狀態(tài)下保存：③為制備特異性強(qiáng)的抗血清，抗原可用標(biāo)準(zhǔn)的生化技術(shù)進(jìn)行純化：④如一次不能收集足夠的抗原，可將每次的蟲體保存在-20℃或?qū)⒖乖瓋龈芍钡椒e累足夠的量。
