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            小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(bEnd.3)復(fù)蘇凍存操作
            點擊次數(shù):1066 更新時間:2021-09-26

            小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(bEnd.3)



            細胞介紹

            細胞轉(zhuǎn)染了表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。


            細胞特性

            1) 來源:BALB/c小鼠

            2) 形態(tài)內(nèi)皮細胞

            3) 含量:>1x106 /mL

            4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

            5) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝


            運輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,1000RPM常溫條件離心5min潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。


            細胞用途:僅供科研使用。


            細胞培養(yǎng)步驟

            一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

            1) 準備DMEM培養(yǎng)基(DMEMGIBCO,貨號11965-092)90%;胎牛血清,10%

            2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

            3) 凍存液90%*培養(yǎng)基,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)液氮儲存。

            二. 細胞處理

            1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

            2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養(yǎng)

            對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

            2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化

            3. 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

            4. 將細胞懸液按1215的比例分到新的8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

            3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存


            注意事項:

            1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系

            2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


            實驗代做服務(wù):


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